Anticuerpos: nuevos usos en el laboratorio y en la clínica

10. ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO Y LA CLÍNICA.

10.1. USOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS DE LOS ANTICUERPOS

10.2. USO DE ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO

10.3. TERAPIA CON ANTICUERPOS MONOCLONALES

11. IDENTIFICACIÓN, PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS

11.1. FACS (FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING)

11.2. MÉTODOS DE FASE SÓLIDA

11.3. MACS (Magnetic Activated Cell Sorting)

11.4. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR ANTICUERPOS.

10. ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO Y LA CLÍNICA.

10.1. USOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS DE LOS ANTICUERPOS

Técnicas analíticas/diagnósticas: miden generalmente fuera del organismo por técnicas “in vitro” algún parámetro

  • ELISA enzima inmunoensayo mediadores, seropositividad
  • WESTERN inmunoelectroforesis de proteínas, inmunodetección
  • IMMUNOHISTOQUIMICA, biopsias, anatomía patológica
  • NEFELOMETRIA turbidometría, determinación Ig séricas
  • CITOMETRIA DE FLUJO Diagnóstico de leucemias

Técnicas terapéuticas: diseñadas para curar.

  • Tratamiento antineoplásico destrucción células tumorales
  • Tratamientos antiinflamatorios. Neutralización de mediadores proinflamatorios
  • Inmunoestimulación con citocinas o vacunación con antígenos

10.2. USO DE ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO

  • Fundamento: Pueden ser utilizados como nanoherramientas capaces de reconocer específicamente y a las que nosotros podemos sujetar, localizar o medir.
  • Especificidad en el reconocimiento aportada por la región Fab del anticuerpo.
  • Posibilidad de marcaje: radioactivo, enzimatico, fluorescente, con puente biotina-avidina. Detección y medida.
  • Unión a soportes (magnéticos o de plástico) por región Fc. Separación y purificación molecular y celular.

10.3. TERAPIA CON ANTICUERPOS MONOCLONALES

1.- ANTITUMORAL.

a) CONJUGADOS:

– RADIOCONJUGADOS (Fósforo, Estroncio, Yodo, Ytrio)

I-antiCD45 leucemias mieloides agudas

Zevalin antiCD20 de ratón vida corta Itrio 90

Bexxar antiCD20 de ratón Iodo131

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– QUIMIOCONJUGADOS.

  • AntiCD33 Mylotarg conjugado con chaleomicina (CMA-676) produce especies altamente reactivas que dañan el DNA e inducen apoptosis. El antígeno CD33 se endocita al ser reconocido por el anticuerpo anti CD33. Se emplea en leucemias mieloides agudas.
  • AntiCD22 Conjugados con RNAsas se experimentan en linfomas.

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b) NO CONJUGADOS:

– ACCIÓN ANTITUMORAL

  • AntiCD20 (Rituximab) para linfomas y Leucemias de células B.
  • AntiCD52 (Campath 1H) tumores de células B, enfermedad mínima residual, rechazo de órganos e injerto contra huésped, enfermedades autoinmunes.
  • AntiCD40 induce AICD en linfomas.

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– SELECTIVA. Conjugados con partículas magnéticas.

  • AntiCD34 para purificación de células madre hematopoiéticas (CD34+) por selección inmunomagnética.
  • Permite purificar células madre a partir de sangre periférica.

– ELIMINACIÓN DE CÉLULAS.

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2.- TERAPIA ANTI-INFLAMATORIA.

– Anticuerpos anticitocina Anti-TNFa Infliximab

  • Neutralizan mediadores proinflamatorios
  • Tienen un efecto drástico efecto antiinflamatorio
  • Se usan en Enfermedad de Chron, Artritis reumatoide.

– Receptores solubles de TNF Etanercep

  • También neutralizan TNF pero tienen vida más corta.

– Quimeras con región Fc. IgG. alargan vida media del receptor soluble

11. IDENTIFICACIÓN, PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS

11.1. FACS (FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING)

• Anticuerpos unidos a compuestos fluorescentes son reconocidos en la superficie de cada célula.

• Células de los fenotipos seleccionados son reconocidas una a una y separadas en función de las combinaciones de parámetros seleccionados.

• Aplica un campo eléctrico que desvía trayectoria de caída de la célula hacia el contenedor de fracción deseado.

• Se pueden clonar células de características específicas:

• Características Metabólicas de las Células: Nivel de pH, estado redox, nivel de calcio

• Separación de células que expresan un gen reporter (proteínas fluorescentes)

• Separación de poblaciones celulares en función de expresión de diferentes antígenos (intra o extracelulares) a los que se unen anticuerpos con marcaje fluorescente.

• Separación de poblaciones celulares en función de su tamaño y complejidad interna Contenido de ADN: Estudio de la fase de ciclo celular en la que se encuentra la célula

• Separación de células que han iniciado el proceso de muerte por apoptosis, de células viables y células necróticas

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11.2. MÉTODOS DE FASE SÓLIDA

Fijación de anticuerpos por su región Fc a una fase sólida.

Panning: Se realiza la fijación de los Ab a plástico. Las células portadoras del antígeno se unen al soporte, después se realiza un lavado y por último la separación mecánica o química.

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11.3. MACS (Magnetic Activated Cell Sorting)

– El sistema autoMACS (Miltenyi Biotec) permite la separación automatizada de células mediante bolas paramagnéticas adheridas a la superfície celular mediante anticuerpos monoclonales.

– Anticuerpos unidos a micropartículas magnéticas son retenidos en una matriz ferromagnética (fase sólida) cuando se aplica un campo magnético. Lavado y elución por eliminación del campo magnético.

– Tiene capacidad para separar hasta 4 x 109 células en 5 minutos y realizar diferentes procesos de separación secuencialmente, con un enriquecimiento de la subpoblación inicial de hasta 10.000 veces.

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11.4. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR ANTICUERPOS.

– Este método está basado en la especificidad de la interacción de los anticuerpos monoclonales que se unen a antígenos de la superficie celular.

– Posteriormente, se adiciona un suero sin descomplementar. El compelemto se activa y hay eliminación de una subpoblación que lleva un antígeno de membrana específico.

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