10. ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO Y LA CLÍNICA.
10.1. USOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS DE LOS ANTICUERPOS
10.2. USO DE ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO
10.3. TERAPIA CON ANTICUERPOS MONOCLONALES
11. IDENTIFICACIÓN, PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS
11.1. FACS (FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING)
11.3. MACS (Magnetic Activated Cell Sorting)
11.4. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR ANTICUERPOS.
10. ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO Y LA CLÍNICA.
10.1. USOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS DE LOS ANTICUERPOS
Técnicas analíticas/diagnósticas: miden generalmente fuera del organismo por técnicas «in vitro» algún parámetro
- ELISA enzima inmunoensayo mediadores, seropositividad
- WESTERN inmunoelectroforesis de proteínas, inmunodetección
- IMMUNOHISTOQUIMICA, biopsias, anatomía patológica
- NEFELOMETRIA turbidometría, determinación Ig séricas
- CITOMETRIA DE FLUJO Diagnóstico de leucemias
Técnicas terapéuticas: diseñadas para curar.
- Tratamiento antineoplásico destrucción células tumorales
- Tratamientos antiinflamatorios. Neutralización de mediadores proinflamatorios
- Inmunoestimulación con citocinas o vacunación con antígenos
10.2. USO DE ANTICUERPOS EN EL LABORATORIO
- Fundamento: Pueden ser utilizados como nanoherramientas capaces de reconocer específicamente y a las que nosotros podemos sujetar, localizar o medir.
- Especificidad en el reconocimiento aportada por la región Fab del anticuerpo.
- Posibilidad de marcaje: radioactivo, enzimatico, fluorescente, con puente biotina-avidina. Detección y medida.
- Unión a soportes (magnéticos o de plástico) por región Fc. Separación y purificación molecular y celular.
10.3. TERAPIA CON ANTICUERPOS MONOCLONALES
1.- ANTITUMORAL.
a) CONJUGADOS:
– RADIOCONJUGADOS (Fósforo, Estroncio, Yodo, Ytrio)
I-antiCD45 leucemias mieloides agudas
Zevalin antiCD20 de ratón vida corta Itrio 90
Bexxar antiCD20 de ratón Iodo131
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– QUIMIOCONJUGADOS.
- AntiCD33 Mylotarg conjugado con chaleomicina (CMA-676) produce especies altamente reactivas que dañan el DNA e inducen apoptosis. El antígeno CD33 se endocita al ser reconocido por el anticuerpo anti CD33. Se emplea en leucemias mieloides agudas.
- AntiCD22 Conjugados con RNAsas se experimentan en linfomas.
b) NO CONJUGADOS:
– ACCIÓN ANTITUMORAL
- AntiCD20 (Rituximab) para linfomas y Leucemias de células B.
- AntiCD52 (Campath 1H) tumores de células B, enfermedad mínima residual, rechazo de órganos e injerto contra huésped, enfermedades autoinmunes.
- AntiCD40 induce AICD en linfomas.
– SELECTIVA. Conjugados con partículas magnéticas.
- AntiCD34 para purificación de células madre hematopoiéticas (CD34+) por selección inmunomagnética.
- Permite purificar células madre a partir de sangre periférica.
– ELIMINACIÓN DE CÉLULAS.
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2.- TERAPIA ANTI-INFLAMATORIA.
– Anticuerpos anticitocina Anti-TNFa Infliximab
- Neutralizan mediadores proinflamatorios
- Tienen un efecto drástico efecto antiinflamatorio
- Se usan en Enfermedad de Chron, Artritis reumatoide.
– Receptores solubles de TNF Etanercep
- También neutralizan TNF pero tienen vida más corta.
– Quimeras con región Fc. IgG. alargan vida media del receptor soluble
11. IDENTIFICACIÓN, PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS
11.1. FACS (FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING)
• Anticuerpos unidos a compuestos fluorescentes son reconocidos en la superficie de cada célula.
• Células de los fenotipos seleccionados son reconocidas una a una y separadas en función de las combinaciones de parámetros seleccionados.
• Aplica un campo eléctrico que desvía trayectoria de caída de la célula hacia el contenedor de fracción deseado.
• Se pueden clonar células de características específicas:
• Características Metabólicas de las Células: Nivel de pH, estado redox, nivel de calcio
• Separación de células que expresan un gen reporter (proteínas fluorescentes)
• Separación de poblaciones celulares en función de expresión de diferentes antígenos (intra o extracelulares) a los que se unen anticuerpos con marcaje fluorescente.
• Separación de poblaciones celulares en función de su tamaño y complejidad interna Contenido de ADN: Estudio de la fase de ciclo celular en la que se encuentra la célula
• Separación de células que han iniciado el proceso de muerte por apoptosis, de células viables y células necróticas
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11.2. MÉTODOS DE FASE SÓLIDA
Fijación de anticuerpos por su región Fc a una fase sólida.
Panning: Se realiza la fijación de los Ab a plástico. Las células portadoras del antígeno se unen al soporte, después se realiza un lavado y por último la separación mecánica o química.
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11.3. MACS (Magnetic Activated Cell Sorting)
– El sistema autoMACS (Miltenyi Biotec) permite la separación automatizada de células mediante bolas paramagnéticas adheridas a la superfície celular mediante anticuerpos monoclonales.
– Anticuerpos unidos a micropartículas magnéticas son retenidos en una matriz ferromagnética (fase sólida) cuando se aplica un campo magnético. Lavado y elución por eliminación del campo magnético.
– Tiene capacidad para separar hasta 4 x 109 células en 5 minutos y realizar diferentes procesos de separación secuencialmente, con un enriquecimiento de la subpoblación inicial de hasta 10.000 veces.
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11.4. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR ANTICUERPOS.
– Este método está basado en la especificidad de la interacción de los anticuerpos monoclonales que se unen a antígenos de la superficie celular.
– Posteriormente, se adiciona un suero sin descomplementar. El compelemto se activa y hay eliminación de una subpoblación que lleva un antígeno de membrana específico.
