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Reacciones de precipitación

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1. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.

1.1. TÍTULO DE ANTICUERPOS.

1.2. REACCIONES DE NEUTRALIZACIÓN.

1.3. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.

1.3.1. INMUNODIFUSIÓN RADIAL SIMPLE (RID) O TÉCNICA DE MANCINI.

1.3.2. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO I (IDD-I).

1.3.3. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.

1. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.

1.1. TÍTULO DE ANTICUERPOS.

El título de Ac es la mayor dilución que da una respuesta POSITIVA. El método de evaluación puede ser midiendo la absorbancia a través de la densidad óptica (DO), o sea una DO mayor a la línea de corte.

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1.2. REACCIONES DE NEUTRALIZACIÓN.

  • Prueba utilizada para detectar inmunidad frente a virus.
  • La neutralización (Nt) mide actividad biológica del virus por lo tanto requiere de virus vivos para poder realizarse. Igualmente, se realiza en un sistema vivo.
  • El principio básico de la prueba de Nt es la inhibición (neutralización) de la infección viral a la célula (cultivo o animal) por medio de los Acs específicos, por lo tanto se neutraliza la acción del virus sobre el hospedero.

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  • Lectura de la placa

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1.3. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.

Hay precipitación de Ag y Ac cuando se combinan en proporciones de equivalencia o cercanas a ella. Estos métodos se utilizan para examinar la relación entre diferentes Ag y/o Ac.

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La precipitación se efectúa sobre geles de agarosa.

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1.3.1. INMUNODIFUSIÓN RADIAL SIMPLE (RID) O TÉCNICA DE MANCINI.

– Método de cuantificación de antígenos.

– Útil en inmunología clínica para cuantificar fracciones plasmáticas humanas como ASH, Inmunoglobulinas, C3 y C4, factores de coagulación.

Esquema de la técnica:

– Placa de gel de agar con suero específico en la matriz. Se incorpora el Ac específico en el gel de agarosa.

– Se hacen pocillos en el gel de agarosa y en ellos se depositan volúmenes estándar de suero con el Ag que se quiere detectar (Ig o proteínas plasmáticas).

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– Fenómeno de difusión. Se deja en reposo 24 horas para que difunda y reaccionen Ag y Ac (punto de equivalencia), formando un anillo de precipitación.

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– Cuantificar. Se mide el diámetro del anillo. Halo proporcional a la conc. de antígeno. Es una prueba CUANTITATIVA.

– Para el calculo de resultados hay que construir una curva patrón a partir de unos estándares que se ponen en el gel junto con las muestras problemas. Se representa gráficamente el cuadrado del diámetro del anillo frente a la concentración de Ag.

– Se interpola en la curva el valor de cada muestra.

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1.3.2. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO I (IDD-I).

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– Prueba CUALITATIVA.

– Se vierte el gel de agarosa sobre portas y se deja gelificar (1-2% de agarosa a pH 7-8.5).

– Se hacen dos pocillos y se deposita el Ag en uno de ellos y el Ac en el otro.

– Ag y Ac difunden y en el punto de encuentro de los dos, y sí las concentraciones son adecuadas, se produce una banda de precipitación.

– Si en la solución existen dos Ag reconocidos por el Ac, habrá dos bandas.

– Se puede usar azul cromassie para teñir las bandas.

1.3.3. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.

También es conocida como Agar gel immunodiffusion test (AGID).

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Se puede utilizar para determinar la relación Ag/Ac (prueba CUALITATIVA). Se enfrenta a un suero con dos o más Ag, y nos podemos encontrar con tres patrones básicos:

a) Identidad (los dos Ag tienen los mismo epitopos reconocidos por el suero): se forma una banda de precipitación con forma de arco continuo.

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b) No identidad (se trata de Ag distintos): se forman bandas de precipitación independientes y no dan un arco continuo. Aparece una figura con forma de aspa.

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c) Identidad parcial (los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por el suero): se forma un arco de precipitación al que le sale un espolón.

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