1. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.
1.2. REACCIONES DE NEUTRALIZACIÓN.
1.3. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.
1.3.1. INMUNODIFUSIÓN RADIAL SIMPLE (RID) O TÉCNICA DE MANCINI.
1.3.2. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO I (IDD-I).
1.3.3. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.
1. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.
1.1. TÍTULO DE ANTICUERPOS.
El título de Ac es la mayor dilución que da una respuesta POSITIVA. El método de evaluación puede ser midiendo la absorbancia a través de la densidad óptica (DO), o sea una DO mayor a la línea de corte.
1.2. REACCIONES DE NEUTRALIZACIÓN.
- Prueba utilizada para detectar inmunidad frente a virus.
- La neutralización (Nt) mide actividad biológica del virus por lo tanto requiere de virus vivos para poder realizarse. Igualmente, se realiza en un sistema vivo.
- El principio básico de la prueba de Nt es la inhibición (neutralización) de la infección viral a la célula (cultivo o animal) por medio de los Acs específicos, por lo tanto se neutraliza la acción del virus sobre el hospedero.
- Lectura de la placa
1.3. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN.
Hay precipitación de Ag y Ac cuando se combinan en proporciones de equivalencia o cercanas a ella. Estos métodos se utilizan para examinar la relación entre diferentes Ag y/o Ac.
La precipitación se efectúa sobre geles de agarosa.
1.3.1. INMUNODIFUSIÓN RADIAL SIMPLE (RID) O TÉCNICA DE MANCINI.
– Método de cuantificación de antígenos.
– Útil en inmunología clínica para cuantificar fracciones plasmáticas humanas como ASH, Inmunoglobulinas, C3 y C4, factores de coagulación.
Esquema de la técnica:
– Placa de gel de agar con suero específico en la matriz. Se incorpora el Ac específico en el gel de agarosa.
– Se hacen pocillos en el gel de agarosa y en ellos se depositan volúmenes estándar de suero con el Ag que se quiere detectar (Ig o proteínas plasmáticas).
– Fenómeno de difusión. Se deja en reposo 24 horas para que difunda y reaccionen Ag y Ac (punto de equivalencia), formando un anillo de precipitación.
– Cuantificar. Se mide el diámetro del anillo. Halo proporcional a la conc. de antígeno. Es una prueba CUANTITATIVA.
– Para el calculo de resultados hay que construir una curva patrón a partir de unos estándares que se ponen en el gel junto con las muestras problemas. Se representa gráficamente el cuadrado del diámetro del anillo frente a la concentración de Ag.
– Se interpola en la curva el valor de cada muestra.
1.3.2. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO I (IDD-I).
– Prueba CUALITATIVA.
– Se vierte el gel de agarosa sobre portas y se deja gelificar (1-2% de agarosa a pH 7-8.5).
– Se hacen dos pocillos y se deposita el Ag en uno de ellos y el Ac en el otro.
– Ag y Ac difunden y en el punto de encuentro de los dos, y sí las concentraciones son adecuadas, se produce una banda de precipitación.
– Si en la solución existen dos Ag reconocidos por el Ac, habrá dos bandas.
– Se puede usar azul cromassie para teñir las bandas.
1.3.3. INMUNODIFUSIÓN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.
También es conocida como Agar gel immunodiffusion test (AGID).
Se puede utilizar para determinar la relación Ag/Ac (prueba CUALITATIVA). Se enfrenta a un suero con dos o más Ag, y nos podemos encontrar con tres patrones básicos:
a) Identidad (los dos Ag tienen los mismo epitopos reconocidos por el suero): se forma una banda de precipitación con forma de arco continuo.
b) No identidad (se trata de Ag distintos): se forman bandas de precipitación independientes y no dan un arco continuo. Aparece una figura con forma de aspa.
c) Identidad parcial (los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por el suero): se forma un arco de precipitación al que le sale un espolón.
